細胞培養是生物醫學研究人員必須掌握的一項基本技能，是實驗成功與否的關鍵。所以，了解細胞培養的基本操作要領，對生物醫藥科研工作者，特別是對基礎研究工作者來說，顯得尤為重要。喆圖小編從實際操作的角度談談體外細胞培養操作要點。

   一、試驗前的準備

   一般細胞生長環境為5%的二氧化碳，37℃恒溫及飽和濕度。在細胞培養開始之前，實驗人員必須查閱資料，了解細胞培養的習慣，如貼壁、半貼壁、懸浮物等。理解細胞生長的營養條件，大多數細胞為10%胎牛血清+89%培養液+1%抗生素。培養基的種類當然很多，高糖、低糖、分化培養基、干細胞培養基等等。依據細胞生長條件，預選適宜的消耗材料，如促貼壁或低吸附培養瓶、培養皿、培養板等。對這些細胞進行處理前，計算出這次處理所需的細胞生長培養基總量，并將生長培養基進行配比。

   二、細胞消化

   與懸浮細胞相比，貼壁細胞的傳代步驟較多，應避免不必要的細胞污染。傳代操作可以在細胞生長集中程度達到80-90%左右的時候進行。由于細胞生長具有濃度依賴關系，過或過早傳代都會影響細胞狀態。取細胞培養盒， PBS清洗2次。此時將細胞培養瓶中的液體吸凈，可采用真空泵、移液管、一次性吸管等，但無論采用何種吸凈方法，均應避免操作手觸碰瓶口而造成污染，吸頭觸碰細胞面而造成細胞機械損傷。將液體吸凈，加入適量胰蛋白酶。胰酶不宜過多，只需少量滴在培養瓶上，傾斜培養可使細胞面覆蓋。細胞可以在這個時候放置在電熱恒溫培養箱里，37℃條件下有利于胰蛋白酶的消化。大約2分鐘就可以消化了。自然地，有些細胞更容易消化，可能消化過程只需要30秒，如TC-1、MC-38等腫瘤細胞株；另一些則消化得更慢，如培養的間充質干細胞(MSCs)。

   如何判斷細胞消化過程是否已經結束？在倒置顯微鏡下我們可以看到細胞的形態，大多數的細胞由多角形轉變為卵圓形，可見細胞浮通過肉眼還可以直接觀察到細胞面從光滑到毛玻璃狀的變化。此可加入適量*的培養基終止胰蛋白酶消化，基本上可加3-5毫升。加水輕輕吹吸后移至離心管進行離心，基本可將離心1000轉離心3分鐘即可分離細胞，轉速不宜過高，否則細胞碎片會隨離心下墜。離心性反應后棄上清液。此時可直接倒入，然后用移液槍清洗殘余液體。

   3.接種

   對上述細胞沉淀物進行重懸。可借助于旋渦震蕩儀進行重懸，也可在重懸細胞前用手指輕彈離心管底部，再加入適量的培養基重懸，切忌直接加入培養基后用移液槍吹干。在2-3個培養瓶中，將重懸好的細胞全部分離，補全生長培養液繼續培養。約8-10毫升的培養液用于T25培養，20-25毫升的培養液用于T75培養。注射后，十字混勻，每日鏡下觀察細胞狀況。傳代比例可根據細胞生長規律進行調節，如快速生長的腫瘤細胞株，可按1:5甚至1:10的比例進行傳代。但原代培養的細胞生長較慢，可在1:2甚至2:3傳代。