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厭氧菌的培養

更新時間:2019-05-17  |  點擊率:2205

 

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養。皰肉培養法MAX簡單,無需特殊設備。厭氧罐法是應用廣泛,是用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境。厭氧袋法在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。厭氧手套箱是一整套系統,是適用的厭氧菌培養法,通常用于厭氧細菌的大量培養研究。

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養。

        在厭氧培養時,通常用培養基中加入還原劑,或用物理、化學方法去除環境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。常用的厭氧培養方法主要有皰肉培養基法、厭氧罐法、厭氧袋法、厭氧手套箱法等,可根據實際情況選用。

        一、皰肉培養基法

        皰肉培養基法是MAX簡單的厭氧培養法之一,無需特殊設備。將皰肉和肉湯裝入大試管,在液面加入凡士林封閉,從而造成無氧環境。在使用前建議將裝有培養基的試管沸水浴10-20min,以使培養基中溶解的氧釋放出來。

        二、厭氧罐法

        厭氧罐法是目前應用較廣泛的一種厭氧培養方法,是用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境,從而進行厭氧菌的培養。厭氧罐法又分為以下兩種:

        1、抽氣換氣法

        該法適用于一般實驗室,其特點是較經濟,可迅速建立厭氧環境。標本接種后,將平板放入厭氧罐,擰緊蓋子,用真空泵抽出罐中空氣,使壓力真空表至-79.98KPa,停止抽氣,充入高純氮氣使壓力真空表指針回0位。連續反復3次,MAX后在罐內-79.98KPa的情況下,充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2,亦可獲得好結果)。罐中需放入冷催化劑鈀粒,可催化罐中殘余的O2和H2化合成水。同時罐中應放有美藍指示管,美藍在有氧的環境下呈藍色,無氧時為紅色。臨用前首先將美藍煮沸使變成無色,放入罐中先呈淺藍色,待罐中無氧環境形成,美藍即可持續無色。

        2、氣體發生袋法

        氣體發生袋系由錫箔密封包裝,其中含有兩種藥片,一種為含枸椽酸和重碳酸氫鈉的藥片,另一種是含有C3H9BNaO3的藥片。前者遇水放出二氧化碳,后者可釋放氫。使用時在袋的右上角剪一小口,灌進10ml蒸餾水,立即放入含有鈀粒、指示劑及平板培養基的厭氧罐中,擰緊蓋子。經2-3分鐘后,可感到蓋子微熱并有少量水蒸氣出現。密封后1小時左右罐中的O2的含量可低于1%。

        三、厭氧袋法

        厭氧袋法即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。該方法不需要特殊設備,操作簡單,使用方便,不但實驗室中可用,而且外出采樣,現場接種等也可用。原理與氣體發生袋法*相同,只是采用塑料袋代替了厭氧罐,氣袋為一透明而密閉的塑料袋,內裝有氣體發生管(有C3H9BNaO3的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。其操作方法為首先將接種的平板培養基放入袋中,盡量擠出袋內空氣,然后密封袋口。然后先折斷氣體發生管,20分鐘后再折斷美蘭指示劑管,如果指示劑不變藍色,說明袋內達到厭氧狀態,即可放入37°C電熱恒溫培養箱進行培養。

        四、厭氧手套箱法(anaerobic glove box)

        厭氧手套箱是一整套系統,是MAX合適的厭氧菌培養法,通常用于厭氧細菌的大量培養研究。厭氧手套箱是一個密閉的大型箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作。厭氧手套箱可調節溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落。使用時應嚴格遵守操作規程,保證箱內氣體比例合理。

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養。皰肉培養法MAX簡單,無需特殊設備。厭氧罐法是應用廣泛,是用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境。厭氧袋法在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。厭氧手套箱是一整套系統,是適用的厭氧菌培養法,通常用于厭氧細菌的大量培養研究。

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養。

        在厭氧培養時,通常用培養基中加入還原劑,或用物理、化學方法去除環境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。常用的厭氧培養方法主要有皰肉培養基法、厭氧罐法、厭氧袋法、厭氧手套箱法等,可根據實際情況選用。

        一、皰肉培養基法

        皰肉培養基法是MAX簡單的厭氧培養法之一,無需特殊設備。將皰肉和肉湯裝入大試管,在液面加入凡士林封閉,從而造成無氧環境。在使用前建議將裝有培養基的試管沸水浴10-20min,以使培養基中溶解的氧釋放出來。

        二、厭氧罐法

        厭氧罐法是目前應用較廣泛的一種厭氧培養方法,是用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境,從而進行厭氧菌的培養。厭氧罐法又分為以下兩種:

        1、抽氣換氣法

        該法適用于一般實驗室,其特點是較經濟,可迅速建立厭氧環境。標本接種后,將平板放入厭氧罐,擰緊蓋子,用真空泵抽出罐中空氣,使壓力真空表至-79.98KPa,停止抽氣,充入高純氮氣使壓力真空表指針回0位。連續反復3次,MAX后在罐內-79.98KPa的情況下,充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2,亦可獲得好結果)。罐中需放入冷催化劑鈀粒,可催化罐中殘余的O2和H2化合成水。同時罐中應放有美藍指示管,美藍在有氧的環境下呈藍色,無氧時為紅色。臨用前首先將美藍煮沸使變成無色,放入罐中先呈淺藍色,待罐中無氧環境形成,美藍即可持續無色。

        2、氣體發生袋法

        氣體發生袋系由錫箔密封包裝,其中含有兩種藥片,一種為含枸椽酸和重碳酸氫鈉的藥片,另一種是含有C3H9BNaO3的藥片。前者遇水放出二氧化碳,后者可釋放氫。使用時在袋的右上角剪一小口,灌進10ml蒸餾水,立即放入含有鈀粒、指示劑及平板培養基的厭氧罐中,擰緊蓋子。經2-3分鐘后,可感到蓋子微熱并有少量水蒸氣出現。密封后1小時左右罐中的O2的含量可低于1%。

        三、厭氧袋法

        厭氧袋法即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。該方法不需要特殊設備,操作簡單,使用方便,不但實驗室中可用,而且外出采樣,現場接種等也可用。原理與氣體發生袋法*相同,只是采用塑料袋代替了厭氧罐,氣袋為一透明而密閉的塑料袋,內裝有氣體發生管(有C3H9BNaO3的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。其操作方法為首先將接種的平板培養基放入袋中,盡量擠出袋內空氣,然后密封袋口。然后先折斷氣體發生管,20分鐘后再折斷美蘭指示劑管,如果指示劑不變藍色,說明袋內達到厭氧狀態,即可放入37°C電熱恒溫培養箱進行培養。

        四、厭氧手套箱法(anaerobic glove box)

        厭氧手套箱是一整套系統,是MAX合適的厭氧菌培養法,通常用于厭氧細菌的大量培養研究。厭氧手套箱是一個密閉的大型箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作。厭氧手套箱可調節溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落。使用時應嚴格遵守操作規程,保證箱內氣體比例合理。

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